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                液相色谱固定相探索完善与发展
                信息来源:[网络] 上传时间:2009-09-21

                1.1 正相色谱
                    
                     八十年代初,人们使用的正相色谱固定相硅胶和吡啶硫氰酸镍盐的络合物晶体能与芳香族化合物形成包合物用于分离芳香族含氮异?#22266;?#21644;胆甾醇晶体。已有人[1]将?#22266;?#21560;附剂作为填料?#22270;?#21512;硅胶作过比较并研?#31185;?#28909;力学机理。具有离子化或非离子化功能团的大孔聚合物也开始应用于液相色谱,这些聚合物在整个酸碱范围内稳定,其中一个缺点是?#27604;?#21058;改变时,它们会?#26085;?#20919;缩,但是其主要的分析方面用途,即从水中收集痕量研究化合物是没有问题的,通过?#23454;?#30340;处理装入色谱柱,一些物质出现过度的峰带变宽 ,而另一些则出现尖、窄的峰带和高分离度,在强碱?#28304;罌资?#33026;中120分钟内可分离100 种尿液中紫外吸收物质[2]。有人将各种链长度的碳氢配位体键?#31995;?#30789;胶上,根据链长短效应研究保留值的影响,也有过类似的报道,将C22 键合相以及制备键合相担体各种条件作过比较,其键长度和吸附自由能成线性关系。一般地,碱溶液会破坏硅?#28023;?#28919;基胺比季铵盐更会腐蚀硅胶填料,故通过加填有5m m 硅胶的短预柱来洗脱碱性溶液。Kataev等[3]用聚三氟苯乙烯涂成的硅胶微粒基质并应用到卤代芳烃、多肽和蛋白质的分离。1993年11月,Majors 讨论了在日本发展迅速的HPLC 聚合物填料。Hosoya 制备了大孔聚合乙烯—对—叔丁基苯甲酸丁酯微球和两种别的聚合物微球的?#38405;?#20197;及更多的C18HPLC固定相。
                    
                       1.2 反相色谱
                    
                     固定相的研究进入九十年代更是热火朝天。这方面的研究报道?#23545;?#36229;过流动相的研究,人们不断探索保留过程及相关烷基键结构的复?#26377;?#21644;可能?#39057;?#30340;各?#20013;?#22411;固定相。Bolok 和其合作者从统计技术研究反相色谱柱的老化过程。Montes 等评价了一种硅氢化物介质的硅氢烯制备烷基键合相,更早时候基质制备可供参考。Moriyama等评价了用2mm硅胶?#39057;?#30340;TSK胶Super ODS新型反相色谱柱的特性,他们论述了如何分离?#20013;?#21270;合物。 Schmid与合作者论述了含饱和脂肪酸键合相的合成与性质,并且与相应的饱和烃固定相的使用作过比较。
                    
                     Pesek和Matyska合成了两种不同的二?#25216;?#21512;相,包括一种是“可靠的?#20445;?#21478;一种通过将7-?#26009;?,2-二醇?#33519;?#36830;接到氢化硅基质上。Jino和Nakamura [4] 评价了用氟处理的键合硅胶作为一种反相色谱基质与常规反相色谱基质的选择性不同。Buszewki 等比较了烷基胺和烷基键合相基质用于反相分离,发现前者对分离极性化合物效果显著,但其热稳定性不如后者。Wongyai 用苯丙?#21450;芳系?#30789;胶上产生离子交换——反相基质的混合模型,并且评价了酸性系?#23567;⒅行院图?#24615;物质的分离效果。Friebe 将Calixarene键?#31995;?#30789;胶上研?#31185;?#20316;为选择相能够形成类似于环糊精的内包合物。Chriswanto 和伙伴们将聚吡咯相涂在硅胶上作为HPLC 的特征化填料。Ge等合成?#21496;?-辛环吡咯改性硅?#28023;?#35780;价其作为蛋白质的分离及探讨酸、碱介质的稳定性。Skapo和Simpson则在流动床中?#39057;?#21453;相基质,他们总结出在有机溶剂?#22411;?#36807;这种途径与常规键合相比较可?#39057;?#37325;?#20013;?#26356;好的基质。Theinpont 论述了在HPLC 柱中已经填装好的硅胶的衍生化过程和通过这种途径?#39057;?#30340;色谱柱和常规键合相色谱柱进行了比较。
                    
                       1.3 亲和色谱
                    
                     日本和?#20998;?#36739;多研究多孔聚合物在液相色谱中的应用,这些聚合物可用于分离各种芳香族化合物和糖类,高分子填料对保留值有较大影响,依据不同溶?#26009;?#33073;次序,可估算出聚合物溶解度参数。它们适用于亲水溶质排阻色谱,如有一种吸附剂TSK-SW 硅胶带有亲水键合相,在较大的流速下能经受高压且有非常高的分离度,尤其适用于蛋白质和腐殖酸的分离。曾有人描述过带羟基、氰基、铵离子及芳基金属醚键?#31995;?#30789;胶上,铵离子键合相主要以氢键结合,通过溶剂作用稳定保留值。
                    
                       1.4 离子交换色谱
                    
                     离子交换固定相的确研究过不少,如八十年代初流行的TSK型SW硅?#26477;?#22522;于二乙胺?#19968;?DEAE) 制成的阴离子交换材料用于蛋白质及核酸的优化分离,低聚糖的分离采用Micro-Pak AX-5。XAD 树脂是色谱中使用最基本的固定相,弱酸、弱碱及两性电解质的分离均有人研究过,反离子以扩散双电层形式存在。也有人制备多孔甲基丙烯酸盐离子交换剂,但多数人愿意使用商品化的交换剂。Sevec 和Frechet [5] ?#39057;?#32858;甲基丙烯酸缩水?#35270;?#37231;共聚二甲基乙烯丙烯酸酯色谱柱 (300×8 mm) 用于蛋白质离子交换的制备色谱。他们能做到一次进样到这种色谱柱分离300mg 的蛋白质混合物。Gawdzrk 和 Matynia制备了一种交联的(p,p’—二羟基苯)—丙烷二环氧?#35270;?#37274;和二乙烯苯的甲基丙烯酸酯的多孔共聚物作为一种最新的HPLC填料并且评价了其作为正相和反相分离的效果。 Danielson 和其合作者[6] 用一种丙胺基硅基质同Kel-F800 ?#20174;χ频?#19968;种弱阴离子交换填料。
                    
                       1.5 空间排阻色谱
                    
                     Kato 等曾通过丁醚或三乙醇苯醚与TSK G3000 SW 空间排阻色谱法 (SEC) 结合合成 HIC 固定相材料,当使用盐溶液梯度洗脱时,可达到很高的分离度。一些极性键合相通过分配比调节的排阻色谱分离蛋白质和多肽。Miller 等报道过用醚相结?#36141;?#25104;大孔硅胶填料:Si-(CH2)3-O-(CH2CH2O)n-R;n=1,2或3;R=Me,Et或n-Bu。用这种填料?#39057;?#30340;色谱柱可至少连续使用五个月其保留值不变。
                    
                     烷基链长度和配体密度能?#33519;?#24433;响到保留值与分离度,而使用低配位数密度基质更易再生,不易变性,对分离大多数蛋白质来?#25285;?#22522;质微球?#26412;?#22312;300? 时具有最强的再生力,?#26412;?#23567;到1mm的多孔微粒填入1cm 的色谱柱中对于蛋白质的分离十分有用。另一改进色谱有效途径是使用非多孔微球(1-3mm), 柱长约30mm,柱效稳定,当小心控制流动相温度和所有仪器组成时,柱外效应很小,曾有人通过洗脱法在2分钟内分离6种蛋白质的混合物。
                    
                     Smigol[7] 论述?#21496;?#30456;聚合甲基丙烯酸缩水?#35270;?#37231;共聚乙烯二甲基丙烯酸酯微球用特殊化功能的多孔介质?#39057;?#20108;醇或二乙胺相有较大孔隙和十八烷基官能团有较少孔隙,这样?#39057;?#30340;一种基?#23454;?#25152;有分子接近极性相时,较少的分子进入多孔介质,而限制了大分子进入到十八烷基键合相中。
                    
                     总之,不论是何种类型的固定相对于?#20013;?#24322;?#22266;?#30340;拆分以及蛋白质和多肽大分子的分离仍在不断的探索完善之中,从发展的趋势看,寻求各种高分子材料作为新型色谱固定相前景光明。

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